Антинуклеарный фактор в крови (АНФ методом непрямой иммунофлюоресценции HEp-2) — тест, использующийся в диагностике аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (системная красная волчанка/СКВ, склеродермия, синдром Фелти, люпоидный гепатит и другие заболевания).
Лабораторная диагностика аутоиммунных болезней соединительной ткани методом рНИФ
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это метод выявления антинуклеарных антител к антигенам клетки человека — нуклеиновым кислотам (дсДНК/осДНК/РНК, рибонуклеопротеинам) и многих других антигенов (белков, ферментов) при помощи метода нРИФ на клетках HEp-2.
Антинуклеарные антитела можно обнаружить благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp-2 — клетки эпителиальной карциномы гортани человека), поскольку ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержит все антигены человека, что позволяет выявлять в одном тесте основные антинуклеарные антитела. Иными словами клетки НЕр-2 используются как своего рода как матрица для выявления аутоантител в сыворотке больного человека.
Интерпретация результатов по характеру флюоресценции
По характеру флюоресценции ядер (люминисцентная микроскопия в реакции НИФ — непрямой иммунофлуоресценции) можно установить вид аутоиммунного заболевания. Всего различают более 20 видов окрашивания структур клеток НЕр-2. По характеру свечения выставляется предположительный диагноз. Например, гомогенный тип обнаруживается при системной красной волчанке или склеродермии, а точки в ядре характерны при аутоиммунных заболеваниях печени.
Следует учитывать, что аутоантитела выявляются и при других заболевания аутоиммунной природы (диабет 1 типа, тиреоидит), онкологических заболеваниях, воспалительных процессах, вирусном гепатите. При оценке данных, следует учитывать, что в редких случаях (около 2%) эти антитела появляется без признаков какого либо аутоиммунного заболевания и у лиц старшего возраста.
Основные показания для назначения
Дифференциальная диагностика заболеваний соединительной ткани и заболеваний печени аутоиммунной природы (аутоиммунный гепатит, билиарный цирроз, холангит). Для повышения качества диагностики рекомендуется проводить комплексные исследования (см. профиль «Ревматологический», «Боли в суставах», «Скрининг болезней соединительной ткани»).
Преимущества и ограничения метода рНИФ
В данном разделе рассмотрены как сильные стороны, так и слабые места метода рНИФ. Цель — детально проанализировать баланс положительных и негативных аспектов, чтобы помочь исследователям и практикам в осознанном выборе этого метода для их задач.
- Высокая чувствительность: Метод рНИФ обладает значительной чувствительностью к изменению физических и химических свойств образцов, что позволяет получать точные данные и проводить детализированные исследования.
- Относительная простота использования: Благодаря использованию современных технологий и оборудования, рНИФ не требует высокой квалификации пользователя, что облегчает его применение в различных областях науки и промышленности.
- Широкий спектр применяемых образцов: Метод рНИФ может использоваться для анализа большого количества различных материалов и веществ, что делает его универсальным инструментом в исследовательских и производственных процессах.
- Быстрота проведения анализа: РНИФ позволяет получить результаты в короткие сроки, что способствует оперативному принятию решений в научных и производственных задачах.
Несмотря на многочисленные достоинства, как и у любого другого метода, у рНИФ существует ряд ограничений, которые следует учитывать при его использовании.
- Вероятность ошибок: Из-за высокой чувствительности метода возможны погрешности и ошибки в результатах, особенно если метод используется неправильно или в неподходящих условиях.
- Стоимость оборудования: Современное оборудование, необходимое для проведения анализа методом рНИФ, может быть достаточно дорогим, что ограничивает его доступность для некоторых организаций и исследовательских групп.
- Необходимость валидации методики: Для обеспечения точности результатов требуется тщательная проверка и валидация методики, что может существенно увеличить временные и ресурсные затраты.
- Ограничения по типам анализируемых образцов: Несмотря на широкий спектр применения, существуют специфические материалы и условия, при которых метод рНИФ не является оптимальным выбором для анализа.
Таким образом, методы рНИФ обладают значительными преимуществами, но их применение требует учета всех возможных ограничений для достижения максимально точных и надежных результатов в исследованиях и практике.
Видео по теме:
Вопрос-ответ:
Что такое антинуклеарный фактор (АНФ) и зачем его измеряют в крови?
Антинуклеарный фактор (АНФ) представляет собой антитела, направленные против собственных клеточных ядер организма. Измерение уровня АНФ в крови производится для диагностики, контроля и мониторинга аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит и другие. Тест помогает выявить наличие и активность аутоиммунного процесса, что важно для постановки правильного диагноза и подбора соответствующего лечения.
Почему используется метод непрямой иммунофлюоресценции HEp-2 для определения АНФ?
Метод непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) с использованием клеток HEp-2 признан «золотым стандартом» для определения ANF благодаря своей высокой чувствительности и специфичности. Клетки HEp-2 обладают множеством антигенных мишеней, что позволяет выявлять различные типы аутоантител. В ходе теста сыворотка пациента наносится на клетки, затем добавляется флуоресцентный краситель, связывающийся с антителами. При рассмотрении под флуоресцентным микроскопом можно увидеть характерное светящееся изображение, что позволяет определить наличие и тип ANF.
Какие результаты могут быть получены при тестировании на АНФ и как их интерпретировать?
Результаты тестирования на АНФ могут варьировать по титру и типу свечения. Титр указывает концентрацию антител: высокие титры (>1:160) часто ассоциированы с аутоиммунными заболеваниями. Тип свечения (гомогенный, пятнистый, крупнозернистый и другие) также предоставляет информацию о возможном диагнозе. Например, гомогенное свечение может быть связано с системной красной волчанкой или медикаментозно индуцированной волчанкой, тогда как пятнистое свечение характерно для системной склеродермии или синдрома Шегрена. Однако важно помнить, что положительный результат не является однозначным показателем наличия заболевания — требуется комплексная оценка клинической картины и дополнительных тестов.
Что означает отрицательный результат теста на АНФ – полностью ли он исключает возможность аутоиммунного заболевания?
Отрицательный результат теста на АНФ снижает вероятность наличия аутоиммунного заболевания, однако не исключает её полностью. Некоторые аутоиммунные заболевания могут протекать без обнаруживаемых антинуклеарных антител в крови, или их уровень может быть слишком низким для обнаружения стандартными методами. Важно учитывать симптомы и другие диагностические тесты при оценке состояния пациента.
Каковы возможные побочные эффекты или риски проведения теста на АНФ методом непрямой иммунофлюоресценции на клетках HEp-2?
Непрямой иммунофлюоресцентный тест на АНФ на клетках HEp-2 обычно является безопасной процедурой с минимальными рисками. Основной дискомфорт связан с процедурой забора крови – может возникнуть легкая боль при проколе кожи, небольшая гематома или кровоподтек на месте прокола. В редких случаях возможно головокружение или обморок у чувствительных пациентов. Общее состояние пациента может влиять на степени неприятных ощущений, но серьезные побочные эффекты от самого теста отсутствуют.
